重庆计量检定中心脂肪酸气相色谱分析
来源: | 作者:proc22dfc | 发布时间: 2019-05-23 | 13 次浏览 | 分享到:
    先讲一下脂质组学中每每要研究的血浆阐发,此中一个重要的项目是阐发此中的脂肪酸,上面一个例子,概要介绍了血浆中脂肪酸的主要身分:
  “固然游离脂肪酸只占血浆中脂肪酸的一小部分,但它代表一类高度代谢活性的脂质,脂肪构造是血浆游离脂肪酸的主要来源,其分布与食品的脂肪酸构成亲昵相干。在正常情况下从脂肪构造中开释脂肪酸与构造对能量的必要紧密相连。但是当代谢失调时,这种平衡被打乱,导致脂解增加,会开释出多于构造所必要脂肪酸的量。康健人经过一夜禁食后血浆中含有214 nmol/ml游离脂肪酸,油酸(18:1)的含量最高,其次是棕榈酸(16:0)和硬脂酸(18:0),这三种酸占全部游离脂肪酸的78%。亚油酸(18:2)和花生四酸(20:4) 是主要的多不饱和脂肪酸(约占8%)。但是有营养作用的α-亚麻酸(18:3ω-3),二十碳五烯酸(20:5, EPA)和二十二碳六烯酸(22:6, DHA)也占据肯定比例,约为全部游离脂肪酸的1%。重庆计量检测
  气相色谱被认为是阐发庞大混淆物中脂肪酸的牢靠要领,这一要领可追述到上世纪50年代,气相色谱的呈现于脂肪酸的阐发有亲昵的干系,1952年气相色谱发明人A. T. James 和 A. J. P. Martin就用最为原始的自制气相色谱仪阐发小分子脂肪酸(Biochem J,1952,50:679),他们首次阐发气-液分派气相色谱的原理,计划了主动滴定检测脂肪酸的气相色谱仪。实验历程中利用的色谱柱为玻璃柱,其内径为4mm,长度为5英尺,牢固相是把DC 550硅油涂渍在硅藻土Celite 545上。分离小分子脂肪酸的色谱
  今后阐发脂肪酸的一个重大进步是把脂肪酸进行甲酯化,1956年James和Martin利用气体密度检测器,并把脂肪酸进行甲酯化,利用阿皮松类高温润滑脂作牢固相,可以分离分子量大的脂肪酸  
   用高沸点润滑脂分离C5-C13直链和支链脂肪酸甲酯的色谱图
  色谱柱:在硅藻土载体上涂渍高沸点润滑脂;柱温:197℃;载气:氮气 14.1mL/min;
  色谱峰: (1) 氛围, (2) n-戊酸甲酯,(3) n-己酸甲酯, (4) 4-甲基己酸甲酯,
  (5) 6-甲基庚酸甲酯, (6) n-酸楚甲酯, (7) 6-甲基酸楚甲酯, (8) n-壬酸甲酯,
  (9) 8-甲基壬酸酯, (10) n-癸酸酯, (11) 8-甲基癸酸酯, (12) 10-甲基十一酸酯  ,
  (13) n-十二酸酯, (14) 10-甲基十二酸酯
  2 脂肪酸气相色谱阐发的发展
  脂肪酸的气相色谱阐发由于它的极性和挥发性不好而带来贫苦,所以首先要把它的极性羰基转化成易于挥发的非极性衍生物。有多种烷基化试剂可以进行羰基的衍生化,利用最多的是进行甲基化,分外是利用氢火焰离子化监测器(FID)气相色谱时,尤为方便普及。但是利用FID也有一些不敷之处。绝对的定量要依靠内标物的信号强度,经常利用的内标物是十七酸(而不是利用化学和物理性子与所测定脂肪酸相近的同位素标志脂肪酸混淆物作内标)。人类体内不克不及合成奇数碳链的脂肪酸(包罗碳17酸),但是人们可以经过食品摄取它们,它们存在于血液的血浆中,增加内标物十七酸的量,从而扰乱定量阐发。
  进一步讲,FID不克不及提供分子质量或其他结构特征信息,以便区分差异的脂肪酸,所以色谱和FID只是解决把全部要研究的脂肪酸分子完全分离开,用质谱解决脂肪酸的结构信息。大家应该晓得利用电子轰击电离脂肪酸分子很容易被打成碎片,经过这些碎片可以进行脂肪酸的结构阐发,但是灵敏度遭到限制。弱电离技术好比负化学电离(NCI)可以改进检测限。利用卤代衍生化试剂可以进一步进步检测灵敏度,这种试剂增加了电子亲和力,可改进NCI-MS的灵敏度。Kawahara 利用五氟基苄(PFB) 作衍生化试剂来衍生化有机羧酸,这样的含氟衍生物电子很容易被俘获。今后这一要领扩展到脂肪酸的衍生化为脂肪酸酯,与脂肪酸甲酯相比,它很容易被NCI-MS检测。所以利用五氟基苄进行衍生化有利于进步检测灵敏度。许多研究者利用PFB做衍生化试剂进行脂质组学中的脂肪酸阐发  
  3 国表里进行气相色谱阐发脂肪酸的一些例证,
  为了进一步了解进行气相色谱阐发脂肪酸的详细情况,上面表1列出近50例阐发各种样品中脂肪酸的色谱柱和分离工具。表2列出国外文献中阐发人体构造中脂肪酸的例证。
  海内气相色谱阐发脂肪酸的色谱柱和阐发工具 ,重庆计量校准资质
  4 脂肪酸气相色谱阐发所用色谱柱
  从已颁发的文献看阐发整体脂肪酸需用非极性的聚硅氧烷毛细管色谱柱,如聚二甲基硅氧烷,分离多不饱和脂肪酸需用极性强的色谱柱,如OV-275,OV-275(这是聚硅氧烷牢固相中极性最强的色谱柱)和CP-Sil 88(HP-88)。 据安捷伦公司一份研究陈诉(5989-3760 EN),他们对最重要的一些脂肪酸(甲酯)(见表3)进行研究,研究总结认为:聚乙二醇柱对不太庞大的样品可以失掉很好的分离;而中等极性的氰丙基聚硅氧烷柱(DB 23)对庞大的 FAMEs 样品可以失掉很好的分离,对一些顺反异构体也可以失掉分离; 要使顺反异构体分离的更好,就要利用更高极性的 HP-88 氰丙基色谱柱。

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